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酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定内源性干扰（包括噪音、漂移、电压等）因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液面表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液面时，除正常的被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部分被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。

在双主光吸光度测得中，削减了测得扰乱和电路原理扰乱，但是测得后果显著的快好了。致使液界面张度的区别，从而导致单主光吸光度测得时粗差很高。然后用区别的洗條剂会影向到之后放入底物和中断液后的液面实际情况，医药学教育辅导`网了解归整用放入界面生物剂的洗條剂清洁工作后，形成了的液面更凹，对单主光吸光度测试的影向更广，然后与界面生物剂的含量正比。而用弱酸性分馏水洗條后，单、双主光吸光度测试工艺后果首要不符。

在酶联免疫法测定抗原、抗体中，常用标记酶辣根过氧化物酶所使用的底物一般是邻苯二胺或四甲基联苯胺，显色终止后，二者在630nm和655nm处的吸光度值都只在吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测的灵敏度。建议在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首先双波长。这样可以提高临界值处标本的分析准度，减少实验误差。